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摘要優(yōu)化綿羊誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）的電穿孔轉(zhuǎn)染效率。通過系統(tǒng)調(diào)整電壓、脈沖時(shí)間及質(zhì)粒濃度，結(jié)合威尼德電穿孔儀的參數(shù)設(shè)置，篩選出轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞存活率的組合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電壓300V、脈沖時(shí)長(zhǎng)5ms、質(zhì)粒濃度2μg/μL時(shí)，轉(zhuǎn)染效率達(dá)68.2%，細(xì)胞存活率80%。本方案為綿羊iPSC基因編輯研究提供了可靠的技術(shù)支持。引言綿羊誘導(dǎo)多能干細(xì)胞在畜牧育種、疾病模型構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物開發(fā)中具有重要應(yīng)用價(jià)值。然而，其轉(zhuǎn)染效率受限于細(xì)胞膜通透性低及傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法（如脂質(zhì)體）的毒性問題。電穿...

摘要探究丙型肝炎病毒（HCV）非結(jié)構(gòu)蛋白4B（NS4B）對(duì)宿主細(xì)胞基因表達(dá)的影響。通過構(gòu)建NS4B真核表達(dá)載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染Huh-7細(xì)胞，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)篩選差異表達(dá)基因（DEGs）。結(jié)果顯示，NS4B顯著調(diào)控細(xì)胞凋亡、免疫應(yīng)答及脂代謝相關(guān)通路。實(shí)驗(yàn)揭示了NS4B在HCV致病機(jī)制中的潛在作用，為抗病毒靶點(diǎn)開發(fā)提供了理論依據(jù)。引言丙型肝炎病毒（HCV）感染是全球慢性肝病的主要病因之一，可導(dǎo)致肝硬化及肝癌。其非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B作為病毒復(fù)制復(fù)合體的核心組分，參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)...

摘要分子克隆技術(shù)構(gòu)建雞Bcl2基因的重組表達(dá)質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染雞原代成纖維細(xì)胞，探究Bcl2過表達(dá)對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，Westernblot驗(yàn)證Bcl2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率顯著降低，表明Bcl2通過抑制凋亡關(guān)鍵通路發(fā)揮調(diào)控功能，為家禽抗病育種提供理論依據(jù)。引言Bcl2家族蛋白是細(xì)胞凋亡調(diào)控的核心因子，其中抗凋亡成員Bcl2通過抑制線粒體途徑的細(xì)胞色素C釋放，阻斷Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而維持細(xì)胞存活。在家禽疾...

摘要基因表達(dá)譜芯片技術(shù)分析XTP4基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞的差異表達(dá)基因，揭示XTP4在調(diào)控細(xì)胞增殖與凋亡中的潛在機(jī)制。實(shí)驗(yàn)采用威尼德電穿孔儀進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，結(jié)合威尼德紫外交聯(lián)儀完成探針固定，篩選出顯著差異基因并進(jìn)行功能驗(yàn)證。結(jié)果表明，XTP4過表達(dá)可激活多條信號(hào)通路，為腫瘤靶向治療提供新靶點(diǎn)。引言XTP4基因作為近年來發(fā)現(xiàn)的調(diào)控因子，在細(xì)胞周期、代謝及腫瘤發(fā)生中具有重要作用，但其具體作用機(jī)制尚不明確?；虮磉_(dá)譜芯片技術(shù)因其高通量、高靈敏度的特點(diǎn)，已成為篩選差異基因的關(guān)鍵工具。本研究通過構(gòu)...

摘要穩(wěn)定表達(dá)周期性馬來絲蟲基因的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。通過分子克隆技術(shù)將目標(biāo)基因插入表達(dá)載體，利用威尼德電穿孔儀進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，并通過藥物篩選及單克隆擴(kuò)增獲得穩(wěn)定株。Westernblot與熒光定量PCR驗(yàn)證基因表達(dá)，細(xì)胞功能分析表明轉(zhuǎn)染后周期相關(guān)蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。該細(xì)胞系為絲蟲生命周期研究及抗寄生蟲藥物開發(fā)提供了可靠模型。引言馬來絲蟲（Brugiamalayi）是淋巴絲蟲病的主要病原體，其基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制與宿主適應(yīng)性密切相關(guān)。周期型基因的表達(dá)模式在寄生蟲發(fā)育、免疫逃逸及傳播中起關(guān)鍵...

摘要聚乙烯亞胺（PEI）作為非病毒基因載體，其轉(zhuǎn)染效率受多種因素影響。本研究通過系統(tǒng)分析PEI分子量、N/P比、細(xì)胞密度及培養(yǎng)時(shí)間對(duì)體外轉(zhuǎn)染效率的影響，結(jié)合熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估綠色熒光蛋白（GFP）表達(dá)水平。結(jié)果表明，25kDaPEI在N/P比為8:1、細(xì)胞密度為60%時(shí)轉(zhuǎn)染效率高，且48小時(shí)培養(yǎng)后表達(dá)達(dá)峰值。本研究為優(yōu)化PEI介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。引言聚乙烯亞胺（PEI）因其高陽離子電荷密度和“質(zhì)子海綿效應(yīng)”被廣泛應(yīng)用于體外基因轉(zhuǎn)染。然而，其轉(zhuǎn)染效率受制備條件...

摘要建立高效的大鼠胎腦神經(jīng)干細(xì)胞分離培養(yǎng)體系，并優(yōu)化電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù)的實(shí)驗(yàn)參數(shù)。通過機(jī)械分離結(jié)合酶消化法獲取原代神經(jīng)干細(xì)胞，利用含某試劑的無血清培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，并通過威尼德電穿孔儀實(shí)現(xiàn)外源基因的高效轉(zhuǎn)染。結(jié)果顯示，分離的細(xì)胞具備自我更新及多向分化潛能，電穿孔后轉(zhuǎn)染效率達(dá)65%以上。該方法為神經(jīng)干細(xì)胞的功能研究提供了可靠的技術(shù)支持。引言神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）的體外培養(yǎng)與基因編輯技術(shù)是研究神經(jīng)發(fā)育、疾病機(jī)制及再生醫(yī)學(xué)的重要手段。目前，原代神經(jīng)干細(xì)胞的分離常面臨純度低、存活率不穩(wěn)...

摘要電穿孔技術(shù)對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)化效果。通過調(diào)節(jié)電壓、脈沖時(shí)間等參數(shù)，結(jié)合威尼德電穿孔儀，成功實(shí)現(xiàn)了HEK293和CHO細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)表明，優(yōu)化后的電穿孔條件可顯著提升外源基因表達(dá)水平，同時(shí)維持細(xì)胞存活率。研究結(jié)果為電穿孔技術(shù)在基因功能分析和重組蛋白生產(chǎn)中的應(yīng)用提供了可靠依據(jù)。引言基因轉(zhuǎn)染技術(shù)是哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因功能研究和生物醫(yī)藥開發(fā)的核心手段之一。傳統(tǒng)化學(xué)轉(zhuǎn)染法（如脂質(zhì)體法）雖操作簡(jiǎn)便，但在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中效率較低，且易受細(xì)胞類型限制。病毒載體轉(zhuǎn)染效率高，但存...